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FG0414石蠟組織RNA提取試劑盒-2
FG0414石蠟組織RNA提取試劑盒-1

FG0414組織石蠟切片RNA提取試劑盒 (磁珠法)

[項目編號]FG0414-L

[規格]96

組織RNA提取試劑盒 (磁珠法)

 

[產品介紹]

該試劑盒采用獨特的脫蠟配方,不含二甲苯,可在石蠟切片中釋放痕量RNA,以及基於超順磁性的磁粉純化技術簡單且耗時。獲得的總數RNA可以直接使用逆轉錄聚合酶鏈反應、熒光定量、第二代測序等實驗。該試劑盒還可與移液工作站和磁棒法磁珠自動提取係統高效使用,用於快速和大樣品提取。

凡知醫療科技 (江蘇) 有限公司

[儲存條件]

蛋白酶K,DNase我,DNase稀釋劑保存在-20

磁珠懸浮液2至8

其他組件儲存在室溫下

[套件組件]

組件名稱

96

脫蠟劑

95毫升

去蛋白溶液DPB

60毫升

裂解物LB

30 毫升

緩衝區WB1

60毫升

緩衝區WB2

30毫升

洗脫液RFW

6毫升

磁珠懸浮液

1.1毫升

蛋白酶K

1.1毫升

DNase

1毫升

DNase稀釋劑

1.5毫升

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

[用戶設備和自備試劑]

恒溫振蕩混合器

微管磁性框架

無核酸酶異丙醇

無核酸酶無水乙醇

0.1% DEPC

離心機

 

[試劑製備]

DNase混合溶液製備: 將10μl DNase15μl DNase稀釋劑充分混合並加入125 μ l0.1% DEPC水,加入到每個反應管中150 μ l混合物,溶液需要準備好使用。

在使用產品之前,請在緩衝液中標記試劑瓶。WB1,緩衝區WB2並標記它。

注意事項:

蛋白酶K溶液不應長時間放置在室溫下,以免影響其活性。

磁珠懸浮液需要旋轉,使其在使用前充分混合。

由於冷凍和離心可能會嚴重損害磁珠的性能和性能,因此請勿冷凍和離心磁珠的懸浮液。

[程序]

組織切片: 組織石蠟切片的厚度可以是5-10 Μ m,帶麵積0.5厘米2; 新鮮切片可以直接放在1.5毫升在離心管中; 如果切片已安裝在載玻片上,則可以用鋒利的單麵刀片將其刮下並放入1.5毫升在離心管裏。

切成組織1.5毫升離心管900 Μ l脫蠟劑,劇烈的渦旋振蕩20秒允許溶液覆蓋組織切片。

添加到離心管中300 Μ l去蛋白溶液 DPB,劇烈的渦旋振蕩20秒使其成為乳白色混合物,並將離心管放在離心機中。17000×g離心1分鍾,將上層的蠟相丟棄 (如果將其吸到下層溶液中,則可以添加DPB250 μ l)。

添加到離心管中10 Μ l蛋白酶K解決方案,渦旋振蕩20秒使其充分混合,將離心管轉移到恒溫振蕩混合器中,56,800轉/分,60分鍾設定恒溫振蕩混合器或金屬浴參數,90℃,60分鍾,然後將瞬時離心收集管蓋上的液體後室的溫度放在一邊。5分鍾

向離心管中添加與上清液相同體積的裂解液LB、異丙醇和10μl磁珠懸浮,渦流20秒,並且室溫不斷反轉。15分鍾將離心管放在磁性框架上,並使其站立2分鍾磁性分離 (如果管蓋上殘留有磁珠,則可以將離心管與磁性框架一起翻轉幾次)。磁珠被完全吸附後,上清液被吸收丟棄,以避免磁珠被吸收和丟棄。

添加到離心管中400 μ l WB1,全渦流30秒,轉移到磁性框架上休息2分鍾,當磁珠完全吸附時,小心地吸收和丟棄上清液,避免吸收和丟棄磁珠,並在室溫下幹燥。3分鍾

添加到離心管中150 μ l DNase混合,輕輕振蕩並重新懸浮磁珠,將離心管移至恒溫振蕩混合器,37,800轉/分,15分鍾消化和刪除DNA

添加到離心管中650 Μ l WB1,漩渦30秒重懸磁珠,室溫連續反向和混合5分鍾。轉移到磁性框架上2分鍾,當磁珠完全吸附時,要小心地吸收和丟棄上清液,以免吸收和丟棄磁珠。

添加到離心管中500 μ l WB2,漩渦30秒重新懸浮磁珠並將其轉移到磁性框架中進行休息。2分鍾,當磁珠完全吸附時,要小心地吸收和丟棄上清液,以免吸收和丟棄磁珠。

重複步驟10一次。

添加到離心管中500 μ l無水乙醇,渦旋30秒重新懸浮磁珠並將其轉移到磁性框架中進行休息。2分鍾,當磁珠完全吸附時,要小心地吸收和丟棄上清液,以免吸收和丟棄磁珠。

一個短離心機,收集管子壁上的液滴,將它們轉移到磁性框架上,吸入並丟棄管子底部的液體,在空氣中幹燥10分鍾大約直到完全幹燥。

注意:1) 磁珠表示無光澤,表示充分幹燥;2),以避免乙醇殘留並影響隨後的洗脫。

加入30到50Μ l洗脫液RFW放入離心管中,充分混合磁珠,並使其在室溫下靜置。5分鍾,轉移到磁性框架上,直到磁珠完全吸附,將上清液轉移到新的1.5毫升離心管,儲存在-20℃ 備用。

 

[特別提示]

該試劑盒適用於自動液體工作站和磁棒法磁珠自動提取係統,提取快速、大樣本。

地址: 中國江蘇省昆山市晨豐路222號
電話: 18556994917苗小姐
電子郵件: xin_chen@firegenbiomed.com

 

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